產(chǎn)品名稱
通用名稱：重組CD20小鼠單克隆抗體試劑（免疫組織化學(xué)法）
英文名稱：Anti-CD20 Antibody, Recombinant mAb

包裝規(guī)格
RMAP0004M1-CD20： 1mL/支

預(yù)期用途
RMAP0004M1用于通過光學(xué)顯微鏡對(duì)石蠟切片中的人類 CD20 分子進(jìn)行定性鑒定。 任何染色或其缺失的臨床解釋應(yīng)通過使用適當(dāng)對(duì)照的形態(tài)學(xué)研究進(jìn)行補(bǔ)充，并應(yīng)在患者的臨床病史和其他診斷測(cè)試的背景下由合格的病理學(xué)家進(jìn)行評(píng)估。

檢測(cè)原理
免疫組織化學(xué)（IHC）染色技術(shù)通過加入針對(duì)抗原的特異性抗體（一抗）、二抗以及帶有顯色底物的酶復(fù)合物，實(shí)現(xiàn)抗原的可視化，其間穿插多個(gè)清洗步驟。生色原經(jīng)酶激活后在抗原位點(diǎn)產(chǎn)生可目視觀測(cè)到的反應(yīng)產(chǎn)物。然后標(biāo)本經(jīng)復(fù)染并蓋上蓋玻片，在光鏡下判讀結(jié)果，輔助病理生理的鑒別診斷，病理生理操作可涉及或不涉及特異性抗原。

主要組成成份
本品由CD20小鼠單克隆抗體和含疊氮鈉防腐劑的組織培養(yǎng)上清液組成。抗體濃度不小于 320.0ug/mL。
每批產(chǎn)品特定的Ig濃度及總蛋白濃度參見瓶標(biāo)簽。

克隆
R1

免疫原
人類扁桃體B細(xì)胞。

物種反應(yīng)性
人、小鼠、大鼠CD20抗原。

Ig類型
Mouse IgG

儲(chǔ)存條件及有效期
2℃-8℃條件下貯存。生產(chǎn)日期見產(chǎn)品標(biāo)簽。失效日期見產(chǎn)品標(biāo)簽。有效期36個(gè)月。不要冷凍。使用后，立即放回2℃-8℃條件下保存。超過產(chǎn)品標(biāo)簽上指定的有效期后不可使用。
 
適用儀器
適用于染色機(jī)（BOND-III, BOND-MAX）,也可手工操作。
 
樣本要求
建議使用10%中性福爾馬林緩沖液固定石蠟包埋的組織切片。
 
檢測(cè)方法
A.自動(dòng)染色操作建議：
A.1 需要而未提供的試劑：
a) Bond脫蠟液
b) Bond洗液
c) Bond ER 溶液 1
d) 過氣化物隣封閉液
e) 一抗后封閉液
f) 聚合物
g) DAB色原體
h) DAB底物緩沖液
i) 蘇木素
A.2 操作規(guī)程：具體操作描述見BOND-III, BOND-MAX儀器說(shuō)明書。
BOND染色機(jī)配備了一組預(yù)定義的操作規(guī)程，這些操作規(guī)程不能被編輯或刪除，但您 可以通過復(fù)制和編輯現(xiàn)有的操作規(guī)程來(lái)創(chuàng)建自己的操作規(guī)程。
預(yù)定義操作規(guī)程已經(jīng)過嚴(yán)格檢測(cè)和驗(yàn)證，正確使用它們可以得到極好的染色效果。對(duì)于您自己創(chuàng)建或編輯的任何用戶操作規(guī)程，您必須自己負(fù)責(zé)檢測(cè)和驗(yàn)證。有能力創(chuàng)建和保存操作規(guī)程并不能說(shuō)明這些操作規(guī)程適合于擬定任務(wù)。
B.手工操作步驟建議：
B.1需要而未提供的試劑：
a）二甲苯或者二甲苯取代物
b）乙醇
c）pH6抗原決定簇修復(fù)液
d）過氧化物酶封閉液
e）蛋白封閉液
f）一抗后封閉液
g）聚合物檢測(cè)系統(tǒng)
h）DAB色原體
i）DAB底物緩沖液
j）蘇木素
B.2 操作步驟：
B.2.1試驗(yàn)釆用Biolight方法,具體描述見說(shuō)明書。
除非另有規(guī)定，否則所有的步驟都在室溫（25℃)條件下進(jìn)行。其操作方法的簡(jiǎn)單描述如下：
a) 用二甲苯或者二甲苯取代物將切片脫石蠟。
b) 梯度乙醇再水化。
c) 用流動(dòng)的自來(lái)水沖洗玻片。
d) 按照以下程序預(yù)處理切片：
在壓力鍋中加熱1.5L建議的修復(fù)溶液到沸騰。加蓋，但不鎖緊蓋子。將玻片放置在金屬染色架上（不要將玻片放得很緊湊，因?yàn)榭赡軙?huì)發(fā)生不均勻的染色)，染色架放在壓力鍋內(nèi)，確保玻片己完全浸沒在修復(fù)溶液中，鎖上蓋子。當(dāng)壓力鍋到達(dá)操作溫度和壓力時(shí)，定時(shí)15分鐘（除非在使用建議中另有規(guī)定為將壓力鍋從熱源上移開，在蓋子關(guān)閉的情況下用冷水沖洗。請(qǐng)不要打開蓋子，直到指示器顯示其壓力己完全釋放。 打開蓋子，移出玻片，將玻片立即放置在冷的自來(lái)水中。
e) 用去離子水沖洗玻片。
f) 過氧化物封閉液中和內(nèi)源過氧化物酶。
g) 用TBS沖洗兩次，每次五分鐘。
h) 用蛋白封閉液孵育5分鐘。
i) 用TBS沖洗兩次，每次五分鐘。
j) 用最佳稀釋度（推薦一抗稀釋度為：1：100,用戶應(yīng)自行建立本實(shí)驗(yàn)室的最佳一抗稀釋度)的一抗孵育30分鐘。
k) 用TBS沖洗兩次，每次五分鐘。
l) 用一抗后封閉液孵育30分鐘。
m) 用TBS沖洗兩次，毎次五分鐘。
n) 在NovoLink聚合物檢測(cè)系統(tǒng)中孵育30分鐘。
o) 用TBS沖洗一次，每次五分鐘，同時(shí)輕輕振搖。
p) 用DAB工作液（見DAB工作液）顯色過氧化物活性5分鐘。
q) 用水沖洗玻片。
r) 用蘇木精復(fù)染。
s) 用水沖洗玻片5分鐘。
t) 脫水、透明化處理并固定切片。
DAB工作液
取50 uL DAB色原體加入到1 ml Biolight DAB底物緩沖液（聚合物），使用前6小時(shí)內(nèi)制備。
了解更多的產(chǎn)品信息或者需要支持，可以聯(lián)系Biolight當(dāng)?shù)胤咒N商或者區(qū)域辦公室，或者訪問 Biolight 網(wǎng)站 http://biolight.wellanimal.com/
 
質(zhì)量控制
使用者實(shí)驗(yàn)室中組織處理和技術(shù)方法的差異會(huì)導(dǎo)致測(cè)定結(jié)果的顯著差異，因此需要使 用以下方法進(jìn)行常規(guī)內(nèi)部控制對(duì)照。
對(duì)照必須使用新鮮的尸體解剖/活組織檢査/外科樣品，并盡快按照與患者樣品相同的方式進(jìn)行福爾馬林固定、組織處理及石蠟包埋。
 
陽(yáng)性組織對(duì)照
用于顯示組織制備和染色技術(shù)正確恰當(dāng)。
每次染色中實(shí)驗(yàn)組檢測(cè)條件應(yīng)包括一個(gè)陽(yáng)性組織對(duì)照。
弱陽(yáng)性染色的組織比強(qiáng)陽(yáng)性染色的組織更適合用于優(yōu)化質(zhì)量控制，并透于檢測(cè)低水平的試劑降解¹。
所建議的陽(yáng)性對(duì)照組織為扁桃體。 如果陽(yáng)性組織對(duì)照不能呈現(xiàn)陽(yáng)性染色，可認(rèn)為試驗(yàn)組織的染色結(jié)果無(wú)效.

陰性組織對(duì)照
應(yīng)在陽(yáng)性組織對(duì)照后使用，以通過一抗標(biāo)記目標(biāo)抗原的特異性。
此外，大多數(shù)組織切片中多種不同的細(xì)胞類型可作為陰性對(duì)照位點(diǎn)，但這應(yīng)由使用者來(lái)自行證實(shí)。
若存在非特異性染色，通常有彌散性。福爾馬林過度固定組織切片中也可觀察到零星染色的結(jié)締組織。使用完整細(xì)胞進(jìn)行染色結(jié)果的判讀壞死或者變性的細(xì)胞通常為非特異性染色2。假陽(yáng)性結(jié)果可能是由于蛋白質(zhì)或者底物反應(yīng)產(chǎn)物的非免疫結(jié)合而產(chǎn)生，假陽(yáng)性也可以是由內(nèi)源性醇類引起，如假性過氧化物(紅細(xì)胞)、內(nèi)源性過氧化物醇(細(xì)胞色素C) 或者內(nèi)源性生物素(如，肝臟、乳房、腦和腎臟)，這取決于所用的免疫染色類型。為了將內(nèi)源性酶活性或者酶的非特異性結(jié)合與特異性免疫反應(yīng)相區(qū)分，額外的患者組織可以分別用底物生色原或者酶復(fù)合物(抗生物素蛋白-生物素、鏈霉親和素、標(biāo)記的聚合物)和底物-生色原進(jìn)行染色。如果在陰性組織對(duì)照中發(fā)生特異性染色，則可認(rèn)為患者組織的染色結(jié)果無(wú)效。

陰性試劑對(duì)照
對(duì)每位患者的切片用非特異性陰性試劑對(duì)照替代一抗進(jìn)行染色，以評(píng)價(jià)非特異性染色， 可以對(duì)抗原位置的特異性染色進(jìn)行更好地判讀。
 
檢測(cè)結(jié)果的解釋
患者組織
檢查用RMAP0004M1染色的患者樣品，陽(yáng)性染色強(qiáng)度應(yīng)以陰性試劑對(duì)照的非特異性 背景染色為依據(jù)來(lái)進(jìn)行評(píng)估.與任何免疫組化檢測(cè)一樣，陰性結(jié)果表示未檢測(cè)到抗原，而不是表示在所分析的細(xì)胞/組織中沒有抗原。必要時(shí)可使用一組抗體，以識(shí)別假陰性反應(yīng)。
正常組織
本品檢測(cè) B 細(xì)胞系細(xì)胞表面的 CD20 抗原，漿細(xì)胞除外。 正常病例總數(shù) = 96。
異常組織
本品染色105/106 彌漫性大 B 細(xì)胞淋巴瘤、11/11 濾泡性淋巴瘤、10/11 慢性淋巴細(xì)胞淋巴瘤、2/11 霍奇金淋巴瘤、7/7 套細(xì)胞淋巴瘤、1/1 急性 B 細(xì)胞淋巴母細(xì)胞淋巴瘤和 1 /1 邊緣區(qū)淋巴瘤。除反應(yīng)性 B 細(xì)胞外，在胎生大 T 細(xì)胞淋巴瘤 (0/7)、血管免疫母細(xì)胞性 T 細(xì)胞淋巴瘤 (0/4)、T/NK 細(xì)胞淋巴瘤 (0/3)、外周 T-細(xì)胞淋巴瘤 (0/1)、T 細(xì)胞淋巴瘤 (0/1)、原發(fā)性急性 B/T 細(xì)胞淋巴母細(xì)胞淋巴瘤 (0/1)、腦腫瘤 (0/2)、食道腫瘤 (0/ 2）、喉腫瘤（0/1）、胸腺腫瘤（0/1）、甲狀腺腫瘤（0/4）、乳腺腫瘤（0/2）、胃腫瘤（0/2）、腫瘤軟組織腫瘤（0/ 2）、舌腫瘤（0/2）、肺腫瘤（0/4）、來(lái)源不明的轉(zhuǎn)移性腫瘤（0/2）、肝腫瘤（0/4）、腎腫瘤（0/2）、卵巢癌（0 /4)、宮頸癌 (0/2)、睪丸癌 (0/2)、結(jié)腸癌 (0/2)、直腸癌 (0/2) 或皮膚癌 (0/2)。評(píng)估的癌癥病例總數(shù) = 209。

RMAP0004M1建議使用推薦用于檢測(cè)正常和腫瘤組織中的人CD20蛋白，作為使用免疫組織化學(xué)染色的常規(guī)組織病理學(xué)的輔助手段。

淋巴瘤組織染色結(jié)果圖例如下： 檢測(cè)方法的局限性
免疫組化是一種多步驟的診斷方法，包括適當(dāng)試劑選擇的專業(yè)培訓(xùn)，組織選擇、固定 和處理，IHC玻片的制備以及染色結(jié)果的判讀。
組織染色依賴于染色前組織的操作和處理。不透當(dāng)?shù)毓潭?、冷凍、解凍、沖洗、干燥、加熱、切片，或者被其他組織或者液體污染都可能產(chǎn)生假象、抗體捕獲或者假陰性結(jié)果。固定和包埋方法的變化或者組織中的自身不規(guī)則性也可產(chǎn)生不一致的結(jié)果過度或者不完全的復(fù)染可影響正確的結(jié)果判讀。
任何染色或者未染色的臨床判讀應(yīng)輔以適當(dāng)對(duì)照的形態(tài)學(xué)研究，并應(yīng)由有資質(zhì)的病理醫(yī)生根據(jù)患者的臨床病史和其他診斷檢測(cè)進(jìn)行評(píng)價(jià)。
博樂萊生物的抗體按照規(guī)定用于有特殊固定要求的石蠟包埋切片。也可能會(huì)發(fā)生意外的抗原表達(dá)，尤其是在腫瘤組織中。任何染色組織切片的臨床判讀必須包括形態(tài)學(xué)分析及相應(yīng)對(duì)照的評(píng)價(jià)。

產(chǎn)品性能指標(biāo)
1.特異性：本品檢測(cè) B 細(xì)胞系細(xì)胞表面的 CD20 抗原，漿細(xì)胞除外。也能使癌細(xì)胞染色。
本品染色了 137/148例淋巴瘤。
2.重復(fù)性
使用三批抗體、在三個(gè)不同時(shí)間內(nèi)在陽(yáng)性組織的三個(gè)切片上的染色符合CD20表達(dá)的預(yù)期分布，在陰性組織中無(wú)染色。
 
注意事項(xiàng)
該試劑采用細(xì)胞培養(yǎng)的上清液制備。由于本產(chǎn)品為生物制品，操作時(shí)應(yīng)適當(dāng)注意。
試劑含有疊氮化鈉。根據(jù)要求可獲得疊氮化鈉的材料安全數(shù)據(jù)表（MSDS）,也可以登錄http://biolight.wellanimal.com/獲得材料安全數(shù)據(jù)表。
任何可能具有毒性的成分請(qǐng)依據(jù)當(dāng)?shù)胤ㄒ?guī)進(jìn)行處理。
固定前后的樣本以及所有與樣本接觸的材料都應(yīng)視為有傳染性的物質(zhì)來(lái)操作，并小心處理不要用嘴吸移液管來(lái)移取試劑，并避免試劑和樣本與皮膚和粘膜接觸。如果試劑或者樣本與敏感部位接觸，用大量的水進(jìn)行沖洗。并盡快就醫(yī)。
盡量減少微生物污染，否則可能會(huì)引起非特異性染色。
推薦以外的孵育時(shí)間或者溫度可能會(huì)產(chǎn)生錯(cuò)誤的結(jié)果。任何類似的變更必須由使用者自行驗(yàn)證。
請(qǐng)?jiān)谑褂们皺z査包裝的完整性。

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