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產(chǎn)品名稱(chēng)：大小鼠外周血淋巴細(xì)胞分離液
產(chǎn)品編號(hào)：BLCK073-100ML
產(chǎn)品規(guī)格：100ML
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說(shuō)明書(shū) |
產(chǎn)品情況：本產(chǎn)品是適用于大鼠和小鼠外周血淋巴細(xì)胞分離的梯度密度分離液，其原理主要是根據(jù)外周血不同細(xì)胞之間的密度差異（紅細(xì)胞和粒細(xì)胞密度大約為1.090 g/mL；血小板密度1.030-1.035 g/mL；淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞密度1.075-1.090 g/mL），通過(guò)梯度密度離心，將淋巴細(xì)胞從外周血中分離出來(lái)。本產(chǎn)品為無(wú)菌、低內(nèi)毒素水平的即用型分離液，液密度為1.083 ± 0.001 g/mL（20℃）。嚙齒動(dòng)物的淋巴細(xì)胞密度稍高于人淋巴細(xì)胞，且小鼠外周血分離易溶血。根據(jù)這些特性，本產(chǎn)品在傳統(tǒng)Ficoll-泛影葡胺基礎(chǔ)上進(jìn)行了優(yōu)化，能夠在血液加入后較長(zhǎng)的時(shí)間內(nèi)維持分離液的穩(wěn)定性，且使用操作簡(jiǎn)單且分離的淋巴細(xì)胞純度高、狀態(tài)好。
儲(chǔ)存運(yùn)輸：冰袋(wet ice)運(yùn)輸；2-8℃避光保存，有效期12個(gè)月。
使用方法：
以分離1 mL鼠類(lèi)外周血淋巴細(xì)胞分離為例，血液和淋巴細(xì)胞分離液體積比為1:1-1:2，在此范圍內(nèi)適當(dāng)調(diào)整；選擇離心管時(shí)需注意，血液和淋巴細(xì)胞分離液總體積不超過(guò)離心管容積的三分之二。
（一）取新鮮抗凝全血（肝素、EDTA、枸櫞酸鈉等抗凝劑皆可）1mL，加入等體積PBS或者無(wú)鈣鎂Hanks緩沖液稀釋?zhuān)吹玫?mL稀釋的全血；
（二）吸取大小鼠外周血淋巴細(xì)胞分離液3 mL加入到15mL無(wú)菌離心管中；
（三）將離心管傾斜45°，將2mL稀釋后的血液沿管壁緩慢加入到離心管中，使血液平鋪在大小鼠外周血淋巴細(xì)胞分離液上層；
（四）建議使用水平轉(zhuǎn)頭離心機(jī)離心，將離心管置于水平轉(zhuǎn)頭適配器中，降低離心機(jī)加減速（3-5檔為宜），室溫條件下800g離心25min；
（五）離心后，輕拿離心管置于管架上，可觀察到明顯的分層現(xiàn)象：最上層是血漿層；中上白膜層是淋巴細(xì)胞層；中下層為淋巴細(xì)胞分離液層；最下層為紅細(xì)胞和粒細(xì)胞層（參考附圖）；
（六）吸除最上層血漿層，小心吸取白膜層（淋巴細(xì)胞層）到另外一個(gè)潔凈的無(wú)菌離心管；
（七）用8 mL PBS或其他緩沖液洗滌后，100g離心10min，棄上清；
（八）重復(fù)步驟七（可選）
根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康挠盟枧囵B(yǎng)基或緩沖液重懸淋巴細(xì)胞。
注意事項(xiàng)：
（一）本產(chǎn)品在使用前需室溫充分平衡并顛倒混勻，分離時(shí)溫度以18-25℃為宜。
（二）為保持淋巴細(xì)胞的活性，血液最好選取采血2 h以?xún)?nèi)的新鮮抗凝血液；如需對(duì)分離的淋巴細(xì)胞進(jìn)行進(jìn)一步的培養(yǎng)和檢測(cè)，請(qǐng)?jiān)诓裳头蛛x的過(guò)程中注意無(wú)菌操作。
（三）稀釋或洗滌緩沖液，不可使用含鈣、鎂離子的緩沖液，以免導(dǎo)致血細(xì)胞凝聚。
（四）過(guò)多的吸取白膜層以外的成分，會(huì)導(dǎo)致交界處的一些粒細(xì)胞或血小板等被混入。
（五）由于不同血液樣本間的差異，可能對(duì)分離效果產(chǎn)生影響。操作過(guò)程中可根據(jù)實(shí)際情況適當(dāng)調(diào)整離心力和時(shí)間，參考離心力和時(shí)間范圍為：500-1000 g、20-30 min。
（六）將血液和淋巴細(xì)胞分離液混合一定時(shí)間后，出現(xiàn)紅細(xì)胞沉降屬于正?，F(xiàn)象。
（七）為了您的健康和安全，操作時(shí)請(qǐng)穿好實(shí)驗(yàn)服、戴好手套。
附圖：分離前后，各層示意圖
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本產(chǎn)品僅供科研使用，不得用于臨床診斷！