瞬時表達
HEK293表達系統(tǒng)可在哺乳動物細胞中進行快速的超高得率蛋白制備，該系統(tǒng)基于該細胞在特定表達培養(yǎng)基上的高密度培養(yǎng)。我們自主研發(fā)的轉(zhuǎn)染試劑與經(jīng)優(yōu)化的稀釋體系相結(jié)合，進行瞬時表達，可使蛋白表達量大幅度提高。
CHO細胞表達系統(tǒng)可分為瞬時表達和穩(wěn)定表達兩大體系，哺乳動物細胞自身具備蛋白折疊和翻譯后修飾的功能，其表達的重組蛋白在分子結(jié)構(gòu)、理化性質(zhì)和生物學(xué)功能方面最接近于天然的高等生物蛋白質(zhì)分子，更有可能獲得與天然分子相同的生物活性，可在短期內(nèi)獲得一定量的可溶性蛋白，同時可以滿足標簽切除、活性測定、HPLC檢測等，可用于基因產(chǎn)物的快速表達和小規(guī)模制備蛋白等方面。目前，瞬時表達技術(shù)廣泛應(yīng)用于疾病診斷、抗體生產(chǎn)、疫苗開發(fā)等多個領(lǐng)域，為客戶提供靈活優(yōu)質(zhì)的服務(wù)。
服務(wù)優(yōu)勢
1）低成本、高效的表達載體；
2）優(yōu)化的哺乳動物表達系統(tǒng)；
3）翻譯后修飾和正確折疊的高產(chǎn)量表達；
4）豐富穩(wěn)定的細胞系培養(yǎng)及開發(fā)經(jīng)驗。
2）優(yōu)化的哺乳動物表達系統(tǒng)；
3）翻譯后修飾和正確折疊的高產(chǎn)量表達；
4）豐富穩(wěn)定的細胞系培養(yǎng)及開發(fā)經(jīng)驗。
服務(wù)流程
Fig. 哺乳動物細胞瞬時轉(zhuǎn)染表達流程圖
服務(wù)周期
| 技術(shù)內(nèi)容 | 周期 | 交付內(nèi)容 | |
|---|---|---|---|
| 基因合成及密碼子優(yōu)化(可選) | 1-2周 | ||
| 載體構(gòu)建 | 克隆至優(yōu)化的表達載體 | 1-2周 |
1.測序報告 2.質(zhì)粒鑒定報告 |
| 質(zhì)粒測序 | |||
| 大量質(zhì)粒制備 | |||
| 表達及純化 | 細胞傳代培養(yǎng) | 1-2周 |
1.可行性報告 2.如表達可行，且QC檢測后有剩余樣品，提供0.1-0.5mg樣品 |
| 瞬時轉(zhuǎn)染HEK293/CHO細胞 | |||
| 蛋白純化 | |||
| SDS-PAGE及UV分析 | |||
| 大量表達及純化(可選) | 1-2周 |
1.純化蛋白 2.SDS-PAGE報告 3.質(zhì)檢報告 |
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應(yīng)用
Fig. 瞬時轉(zhuǎn)染哺乳動物細胞純化page圖（Lane4和Lane5）
穩(wěn)定表達
與瞬時轉(zhuǎn)染不同，穩(wěn)定細胞系構(gòu)建是指外源基因進入受體細胞并整合到細胞的染色體上，使宿主細胞可長期表達目的基因，經(jīng)過抗生素加壓篩選后最終得到可以穩(wěn)定表達蛋白的細胞株。從技術(shù)流程上看，穩(wěn)定細胞株的轉(zhuǎn)染流程是以瞬時轉(zhuǎn)染為基礎(chǔ)，先轉(zhuǎn)染哺乳動物細胞，再對細胞池篩選得到穩(wěn)定的細胞系，剔除未穩(wěn)定整合的細胞，得到有限稀釋的單克隆穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細胞株。
穩(wěn)定細胞系廣泛應(yīng)用于重組蛋白和抗體的生產(chǎn)、檢測分析、基因編輯、功能研究等各個領(lǐng)域，表達的蛋白、抗體穩(wěn)定性更高，批次差異更小。我們的Free Style CHO-S表達系統(tǒng)對培養(yǎng)基、轉(zhuǎn)染試劑及稀釋體系等條件進行了多方面的優(yōu)化，解決了轉(zhuǎn)染后的細胞易出現(xiàn)細胞結(jié)團的問題。
服務(wù)優(yōu)勢
1）細胞來源明確，無污染；
2）直接連續(xù)培養(yǎng)，無需轉(zhuǎn)染；
3）可更高密度培養(yǎng)；
4）穩(wěn)定表達蛋白與基因工程抗體；
5）比瞬時轉(zhuǎn)染得到的蛋白更穩(wěn)定，批間差更??；
6）GS-MSX基因共擴增技術(shù)，外源基因的拷貝會增加至幾百至幾千產(chǎn)量更高；
7）豐富穩(wěn)定的細胞系培養(yǎng)及開發(fā)經(jīng)驗。
2）直接連續(xù)培養(yǎng)，無需轉(zhuǎn)染；
3）可更高密度培養(yǎng)；
4）穩(wěn)定表達蛋白與基因工程抗體；
5）比瞬時轉(zhuǎn)染得到的蛋白更穩(wěn)定，批間差更??；
6）GS-MSX基因共擴增技術(shù)，外源基因的拷貝會增加至幾百至幾千產(chǎn)量更高；
7）豐富穩(wěn)定的細胞系培養(yǎng)及開發(fā)經(jīng)驗。
服務(wù)流程
Fig. 哺乳動物細胞瞬時轉(zhuǎn)染表達流程圖
服務(wù)周期
| 服務(wù)內(nèi)容 | 周期 | 交付內(nèi)容 | |
|---|---|---|---|
| 基因合成及密碼子優(yōu)化(可選) | 1~2周 | ||
| 載體構(gòu)建 | 克隆至表達載體 | 1~2周 |
1.測序報告
2.質(zhì)粒鑒定報告
|
| 質(zhì)粒測序 | |||
| 大量質(zhì)粒制備 | |||
| 瞬轉(zhuǎn)表達評估 | 瞬時表達 | 2周 | 1.評估報告 |
| ELISA或WB檢測表達水平 | |||
| 穩(wěn)定細胞株開發(fā) | 穩(wěn)定轉(zhuǎn)染及篩選 | 12~20周 |
1.表達報告
2.2~3 株穩(wěn)定克隆 (可選)
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| MTX 擴增及篩選 | |||
| 高表達克隆篩選及穩(wěn)定性篩選 | |||
| 細胞建庫 | |||
| 大量表達及純化(可選) | 2~3 周 |
1.純化蛋白
2.SDS-PAGE 報告
3.質(zhì)檢報告
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