慢性病毒包裝服務(wù)
慢病毒（Lentivirus）載體是以HIV-1（人類免疫缺陷1型病毒）為基礎(chǔ)發(fā)展起來的基因治療載體。它能高效的將目的基因（或RNAi）導(dǎo)入動物和人的原代細(xì)胞或細(xì)胞系。具有感染譜廣泛、可以有效感染分裂期和靜止期細(xì)胞、長期穩(wěn)定表達(dá)外源基因等優(yōu)點(diǎn)。慢病毒表達(dá)載體包含了包裝、轉(zhuǎn)染、穩(wěn)定整合所需要的遺傳信息。慢病毒包裝質(zhì)?？商峁┧械霓D(zhuǎn)錄并包裝RNA到重組的假病毒載體所需要的所有輔助蛋白。為產(chǎn)生高滴度的病毒顆粒，需要利用表達(dá)載體和包裝質(zhì)粒同時(shí)共轉(zhuǎn)染細(xì)胞，在細(xì)胞中進(jìn)行病毒的包裝，包裝好的假病毒顆粒分泌到細(xì)胞外的培養(yǎng)基中，離心取得上清液后，可以直接用于宿主細(xì)胞的感染，目的基因進(jìn)入到宿主細(xì)胞之后，經(jīng)過反轉(zhuǎn)錄，整合到基因組，從而高水平的表達(dá)效應(yīng)分子。
服務(wù)優(yōu)勢
1）第三代慢病毒包裝系統(tǒng)，安全性更高
2）17000個現(xiàn)貨cDNA克隆可在2-3天由穿梭載體克隆至慢病毒載體,2周即可交付慢病毒
3）多種慢病毒載體可供選擇，C-端或N-端帶有熒光標(biāo)記（GFP、RFP)和親和標(biāo)簽
4）可根據(jù)客戶要求提供不同滴度（高或低）的慢病毒產(chǎn)品
5）嚴(yán)格的質(zhì)量控制：基因特異引物檢測、Real-time PCR病毒滴度測定
6）可將您感興趣的任何基因克隆至我們的慢病毒載體進(jìn)行慢病毒生產(chǎn)
7）可提供從慢病毒載體構(gòu)建、慢病毒包裝到穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞系構(gòu)建一站式服務(wù)
服務(wù)流程
服務(wù)周期
| 技術(shù)內(nèi)容 | 周期 | 交付內(nèi)容 | |||
| gRNA 設(shè)計(jì)及合成 | 1~2周 |
1）3個gRNA構(gòu)建 2）測序報(bào)告 3）質(zhì)粒結(jié)構(gòu)圖譜 4）質(zhì)檢報(bào)告 5）10ug/載體研究級別質(zhì)粒 |
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| 載體構(gòu)建 | 克隆至需求載體 | ||||
| 質(zhì)粒測序 | |||||
| 質(zhì)粒制備 | |||||
| 病毒制備(針對慢病毒載體) | 2~3 周 |
1）單克隆細(xì)胞株 2）gRNA靶點(diǎn)序列及目標(biāo)區(qū)域測序報(bào)告 3）質(zhì)檢報(bào)告 |
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| 轉(zhuǎn)染 | 穩(wěn)定轉(zhuǎn)染 | ||||
| 病毒侵染 | |||||
| FACS分選 | |||||
| 單克隆制備及細(xì)胞建庫 | 單克隆制備 | 5~8 周 | |||
| PCR鑒定 | |||||
| 測序分析 | |||||
| 細(xì)胞建庫 | |||||
| 鑒定(可選) | qPCR | 2~3 周 | |||
| Western Blot | |||||
應(yīng)用案例
Fig. 質(zhì)粒測序峰圖? 
Fig. 質(zhì)粒測序結(jié)果分析
Fig. 細(xì)胞上清支原體檢測結(jié)果
Fig. 待轉(zhuǎn)染質(zhì)粒鑒定結(jié)果
Fig. GFP融合標(biāo)簽的過表達(dá)慢病毒產(chǎn)品感染目標(biāo)細(xì)胞